衛生部辦公廳關于印發 突發中毒事件衛生應急處置15個技術方案的通知

              2013年3月18日

              各省、自治區、直轄市衛生廳局,新疆生產建設兵團衛生局,中國疾病預防控制中心:

                   為指導各地規范、有效地開展常見突發中毒事件衛生應急處置工作,我部組織制定了氨、氯氣、硫化氫、砷化氫、一氧化碳、單純窒息性氣體、苯及苯系物、甲醇、氰化物、亞硝酸鹽、鹽酸克侖特羅、有機磷酸酯類殺蟲劑、抗凝血類殺鼠劑、致痙攣性殺鼠劑14類常見毒物急性中毒事件衛生應急處置技術方案和《突發中毒事件衛生應急處置人員防護導則》?,F印發給你們(電子版可從衛生部網http://www.moh.gov.cn下載),請參照執行。

                  聯系人:衛生部衛生應急辦公室  韓玉紅

                  電話:010-68792714

                  附件:1.氨
              2.氯氣
              3.硫化氫
              4.砷化氫
              5.一氧化碳
              6.單純性窒息性氣體
              7.苯及苯系物
              8.甲醇
              9.氰化物
              10.亞硝酸鹽
              11.鹽酸克倫特羅
              12.有機磷酸酯類殺蟲劑
              13.抗凝血類殺鼠劑
              14.致痙攣性殺鼠劑
              15.化學中毒事件應急醫學人員防護導則
                                        
                                              二〇一一年七月六日

              急性有機磷酸酯類殺蟲劑
              中毒事件衛生應急處置技術方案


              急性有機磷酸酯類殺蟲劑中毒是短時間內接觸較大量有機磷酸酯類殺蟲劑后,引起以神經系統損害為主的全身性疾病,臨床表現包括毒蕈堿樣、煙堿樣和中樞神經系統三類癥狀。
              1 概述
              有機磷酸酯類殺蟲劑多為易揮發的油狀液體,多數有蒜臭,易溶于多種有機溶劑,多不溶于或微溶于水,遇堿性物質易分解破壞。常見本類殺蟲劑的理化性質和毒性見附件1。
              有機磷酸酯類殺蟲劑可通過呼吸道、皮膚、黏膜和胃腸道吸收。常見接觸機會有:生產、包裝、貯存、搬運、供銷等環節;配制、噴灑、涂莖、施藥工具修理等使用環節;誤服、誤用或投毒等。
              2 中毒事件的調查和處理
              現場救援時首先要確保工作人員安全,同時要采取必要措施避免或減少公眾健康受到進一步傷害?,F場救援和調查工作要求必須2人以上協同進行。
              2.1 現場處置人員的個體防護
              調查和處理經呼吸道和皮膚、黏膜途徑中毒的事件時,如為密閉或半密閉中毒現場,并且出現昏迷/死亡病例或死亡動物,或者有機磷酸酯類殺蟲劑泄漏未得到控制,必須使用自給式空氣呼吸器(SCBA)、B級防護服、化學防護手套、化學防護靴;進入已經開放通風的中毒現場,須選用可防A類氣體和至少P2級別顆粒物的全面型呼吸防護器(參見GB 2890-2009),C級防護服、化學防護手套和化學防護靴。
              調查和處理經口途徑中毒事件時,一般不必穿戴個體防護裝備?,F場采集可疑中毒食品樣品時,須選用可防A類氣體和至少P2級別顆粒物的全面型呼吸防護器,佩戴化學防護手套和化學防護靴,防護服無特殊要求。
              現場救援人員給皮膚污染的中毒病人洗消時,應選用可防A類氣體和至少P2級別顆粒物的全面型呼吸防護器,佩戴化學防護手套和化學防護靴,防護服無特殊要求。
              醫療救護人員在現場醫療區救治中毒病人時,一般不必穿戴個體防護裝備。
              2.2中毒事件的調查
              調查人員到達中毒現場后,應先了解中毒事件的概況,然后進行中毒事件相關場所、人員等調查工作,并及時向中毒事件指揮部提出收集并封存所有可疑中毒食品以及其他可能導致本次中毒事件物品,事件現場控制措施(如通風、切斷危害源等)、救援人員的個體防護、現場隔離帶設置、人員疏散等方面的建議。
              2.2.1 中毒事件相關場所的調查
              經呼吸道和皮膚、黏膜途徑中毒事件的調查內容包括中毒現場環境狀況、氣象條件、通風措施、生產工藝流程、防護條件、接觸人員情況等。經口途徑中毒事件的調查對象為中毒事件涉及的食品生產、加工至食用整個過程的各個場所,調查內容包括食品加工過程(包括原料和配料、調料、食品容器、使用的工具),食品的分裝、儲存的條件等。
              2.2.2中毒事件相關人員的調查。
              調查對象包括中毒病人、目擊證人及其他相關人員。調查內容包括了解中毒事件發生經過,中毒人員的接觸時間、地點、途徑以及物質種類,中毒人數、姓名、性別、工種,中毒的主要癥狀,中毒事件的進展情況、已經采取的緊急措施等。同時,還應向臨床救治單位進一步了解相關資料(如搶救過程、臨床治療資料、實驗室檢查結果等)。
              對現場調查的資料作好記錄,進行現場拍照、錄音等。取證材料要有被調查人的簽字。
              2.3現場中毒樣品的快速檢測
              2
              中毒事件現場采集的可疑中毒食物及中毒病人的嘔吐物、胃內容物、以及血液等樣品可在現場進行定性檢測。如懷疑有機磷酸酯類農藥中毒時,可使用酶化學紙片法快速檢測蔬菜等食品和嘔吐物中有機磷酸酯類農藥殘留量(附件2)。有條件可使用速測卡法(紙片法)和酶抑制率法(分光光度法)測定蔬菜等食品中有機磷酸酯類農藥殘留(附件3和4);可使用硫代乙酰碘代膽堿-二硫雙一硝基苯甲酸法測定中毒病人全血膽堿酯酶的活性(GBZ 52-2002附錄B)。
              2.4中毒事件的確認和鑒別
              2.4.1 中毒事件的確認標準
              同時具有以下三點,可確認為急性有機磷酸酯類殺蟲劑中毒事件:
              a)中毒病人有有機磷酸酯類殺蟲劑接觸機會;
              b)中毒病人出現以毒蕈堿樣、煙堿樣和中樞神經系統癥狀為主的臨床表現;
              c)中毒現場采樣樣品中有機磷酸酯類殺蟲劑含量增高,實驗室檢查全血膽堿酯酶活性降低。
              2.4.2中毒事件的鑒別
              應注意與急性氨基甲酸酯類殺蟲劑中毒事件、中暑等事件進行鑒別。
              2.5 現場醫療救援
              經呼吸道和皮膚、黏膜途徑的中毒病人應立即移離中毒現場至空氣新鮮處,保持呼吸道通暢,脫去被污染衣服,用肥皂水或清水徹底清洗污染的皮膚(包括皺褶部位)、毛發。經口途徑中毒意識清晰的病人,應立即進行催吐。當出現大批中毒病人,應首先進行現場檢傷分類,優先處理紅標病人。
              2.5.1 現場檢傷分類
              a) 紅標,具有下列指標之一者:
              意識障礙;咯大量泡沫樣痰。
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              b) 黃標,具有下列指標者:
              肌顫。
              c) 綠標,具有下列指標者:
              出現頭暈、頭痛、惡心、嘔吐、多汗、胸悶、視物模糊、無力等癥狀。
              D)黑標,同時具備下列指標者:
              意識喪失,瞳孔散大,無自主呼吸,大動脈搏動消失。
              2.5.2 現場醫療救援
              紅標病人立即吸氧、建立靜脈通道,保持呼吸道通暢,靜脈注射5mg~10mg的阿托品,10min~15min可根據病情重復給藥。有條件可肌肉注射0.5g~1.0g的氯解磷定。黃標病人應密切觀察病情變化。出現呼吸節律明顯不規律、窒息或嚴重缺氧克等情況時,及時采取對癥支持措施。綠標病人可暫不予特殊處理,觀察病情變化。
              2.5.3 病人轉送
              中毒病人經現場急救處理后,應立即就近轉送至綜合醫院或中毒救治中心繼續觀察和治療。
              3中毒樣品的采集與檢測
              3.1 采集樣品的選擇
              可能導致中毒的食物和血液是首選樣品。另外,可根據中毒事件的現場調查結果,確定還應采集的其它樣品種類。
              3.2 樣品的采集方法
              固體食品和半流質食品使用具塞玻璃瓶或聚乙烯瓶密閉盛放,采樣量50g~100g;液體樣品(血液除外)使用具塞玻璃瓶或聚乙烯瓶盛放,采樣量300ml~500ml;采集血液樣品前必須注意清洗皮膚表面,防止污染,使用具塞的肝素抗凝試管盛放,采樣量5ml~10ml。
              3.3 樣品的保存和運輸
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              所有樣品采集后最好在4℃條件下冷藏保存和運輸,如無條件冷藏保存運輸,樣品應在采集后24h內進行實驗室檢測。所有實驗室檢測完畢的樣品,應在冷凍條件下保存一周,以準備實驗室復核。
              3.4 推薦的實驗室檢測方法
              a) 全血膽堿酯酶活性測定法——硫代乙酰碘代膽堿-二硫雙一硝基苯甲酸法(GBZ 52-2002附錄B)。
              b) 植物性食品中有機磷和氨基甲酸酯類農藥多種殘留的測定(GB/T 5009.145-2003)
              c) 食品、毒餌、飲水、嘔吐物等樣品中的有機磷農藥可采用火焰光度檢測器(FPD)毛細管氣相色譜法分離和測定(附件5)。
              d) 水果和蔬菜中500種農藥及相關化學品殘留的測定GC-MS法(GB/T 19648-2006)。
              e) 糧谷中372種農藥及相關化學品殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法(GB/T 20770-2006)。
              f) 蜂蜜、果汁和果酒中420種農藥及相關化學品殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法(GB/T 20771-2006)。
              g) 動物肌肉中461種農藥及相關化學品殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法(GB/T 20772-2008)。
              4 醫院內救治
              4.1病人交接
              中毒病人送到醫院后,由接診醫護人員與轉送人員對中毒病人的相關信息進行交接,并簽字確認。
              4.2診斷和診斷分級
              救治醫生對中毒病人或陪護人員進行病史詢問,對中毒病人進行體格檢查和實驗室檢查,確認中毒病人的診斷,并進行診斷分級。
              4.2.1診斷分級 5
              a)觀察對象 具有下列表現之一者:
              i 全血或紅細胞膽堿酯酶活性在70%以下,尚無明顯中毒的臨床表現;
              ii 有輕度的毒蕈堿樣自主神經癥狀和(或)中樞神經系統癥狀,而全血或紅細胞膽堿酯酶活性在70%以上。
              b)輕度中毒 短時間內接觸較大量有機磷殺蟲劑后,在24h內出現較明顯的毒蕈堿樣自主神經和中樞神經系統癥狀,如頭暈、頭痛、乏力、惡心、嘔吐、多汗、胸悶、視物模糊、瞳孔縮小等。全血或紅細胞膽堿酯酶活性一般在50%-70%。
              c)中度中毒 在輕度中毒基礎上,出現肌束震顫等煙堿樣表現。全血或紅細胞膽堿酯酶活性一般在30%-50%。
              d)重度中毒 除上述膽堿能興奮或危象的表現外,具有下列表現之一者,可診斷為重度中毒:
              i 肺水腫;
              ii 昏迷;
              iii 呼吸衰竭;
              iv 腦水腫。
              全血或紅細胞膽堿酯酶活性一般在30%以下。
              4.2.2中間期肌無力綜合征
              在急性中毒后1~4天左右,膽堿能危象基本消失且意識清晰,出現肌無力為主的臨床表現者。
              a)輕型中間期肌無力綜合征 具有下列肌無力表現之一者:
              i 屈頸肌和四肢近端肌肉無力,腱反射可減弱;
              ii 部分腦神經支配的肌肉無力。
              b)重型中間期肌無力綜合征
              在輕型中間期肌無力綜合征基礎上或直接出現下列表現之一者:
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              i 呼吸肌麻痹;
              ii 雙側第IX對及第X對腦神經支配的肌肉麻痹造成上氣道通氣障礙者。
              高頻重復刺激周圍神經的肌電圖檢查,可引出肌誘發電位波幅呈進行性遞減。全血或紅細胞膽堿酯酶活性多在30%以下。
              4.3 治療
              接收醫院對所接收的中毒病人確認診斷和進行診斷分級后,根據病情的嚴重程度將病人送往不同科室進行進一步救治。觀察對象可在觀察室留觀,輕、中度中毒病人送入普通病房住院治療,重度中毒病人立即送至危重癥監護病房搶救。
              4.3.1 清除毒物
              脫去中毒病人污染的衣物,可用肥皂水清洗污染的皮膚、毛發和指甲。眼部污染可用生理鹽水反復沖洗。經口中毒不足24h的病人均要進行洗胃,中毒24h以上者可根據病情選擇是否洗胃。應反復洗胃,直至洗胃液清亮、無味為止。重度中毒病人可保留洗胃管12h~24h,以便病情需要時再次進行洗胃。洗胃后可給予導瀉治療。
              4.3.2 特效解毒劑
              a) 阿托品:為短效抗膽堿藥物,對緩解毒蕈堿樣癥狀和對抗呼吸中樞抑制有效,但對煙堿樣癥狀和膽堿酯酶活性恢復無效。輕度中毒首次劑量1mg~2mg肌內注射,1h~2h后可重復一次,以后酌情減量并延長間隔時間。中度中毒首次劑量2mg~4mg,肌內或靜脈注射,0.5h后可重復一次,“阿托品化”后酌情減量并延長間隔時間。重度中毒首次劑量一般為5mg~10mg靜脈注射,如5min未起作用,立即重復5mg靜脈注射,以后每隔10min~30min給藥一次,每次2mg~5mg,達到“阿托品化”后減量維持“阿托品化”24h以上,逐漸減量停藥。
              阿托品化是指臨床出現瞳孔擴大、口干、肺部濕啰音明顯減少或
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              消失、皮膚干燥以及心率加快等表現。“阿托品化”應綜合判斷,不能僅靠一兩項指征判定。
              b) 鹽酸戊乙奎醚(長托寧):為中長效抗膽堿藥物,可拮抗中樞中毒癥狀和外周的毒蕈堿樣中毒癥狀,但對膽堿酯酶活性恢復無效。用藥方法為肌內注射,首次使用劑量:輕度中毒為1mg~2mg,中度中毒為2mg~4mg,重度中毒為4mg~6mg。以后,根據病情確定給藥劑量和使用時間。鹽酸戊乙奎醚對心率影響較小,使用本藥物時不能以心率變化來確認是否用藥充足。
              c) 膽堿酯酶復能劑:對緩解煙堿樣癥狀有效,常用藥物有氯解磷定和碘解磷定。氯解磷定的用量和用法如下:輕度中毒首次劑量0.5 g肌內注射,2h~3h后可重復一次;中度中毒首次劑量0.5g~0.75g肌內注射或緩慢靜脈注射,1h~2h后重復注射一次,以后酌情減量應用;重度中毒1.0g~1.5g緩慢靜脈注射,0.5h后可重復一次,以后每1h~2h給藥0.5g,但24h用量一般不超過10g,病情好轉后酌情減量并延長間隔時間。如無氯解磷定,可選用碘解磷定,兩種藥物的劑量換算為:1g氯解磷定約相當于碘解磷定1.5g。
              4.3.3 對癥支持治療
              保持呼吸道通暢、加強營養、合理膳食,注意水、電解質及酸堿平衡,防治繼發感染。密切監護心、腦、肺、肝、胰等重要臟器功能,及時給予相應的治療措施。
              出現中間期肌無力綜合征后,應在治療急性中毒的基礎上,密切觀察病情變化,以對癥和支持治療為主。出現呼吸肌麻痹時,及時建立人工氣道,給予機械通氣,維持呼吸功能,同時積極防治并發癥。
              5 應急反應的終止
              中毒食品和其他可疑毒物已經完全收繳和銷毀,中毒相關危險因素已被有效控制,未出現新的中毒病人且原有病人病情穩定24h以上。 8
              附件1
              常用有機磷殺蟲劑的理化性質和毒性
              LD50(mg/kg)
              名稱
              分子式
              理化性質
              常用制劑
              經口
              經皮
              敵敵畏
              C4H7Cl2O4P
              純品無色或琥珀色液體,易揮發,有特殊氣味,可溶于多數有機溶劑,對熱穩定,能水解,堿性液中水解更快。工業品為黃色油狀液體。
              乳油、煙熏劑、緩釋劑
              大鼠
              56-80
              大鼠75-107
              內吸磷
              C8H19O3PS2
              純品無色或淡黃色油狀液體,難溶于水,易溶于有機溶劑,遇堿性物質易分解。工業品為淺棕色液體,有特殊惡臭。
              乳油
              大鼠2.5-12
              大鼠15-20
              對硫磷
              C10H14O5NSP
              純品為幾乎無色無臭的液體或白色針狀晶體,難溶于水,可溶于有機溶劑,遇堿易分解。工業品為黃褐色液體,有大蒜樣臭味。
              乳油、粉劑、顆粒劑
              大鼠
              4-13
              大鼠
              約55
              甲基對硫磷
              C8H10NO5PS
              純品為白色晶體,難溶于水,易溶于苯、二甲苯、乙醇、丙酮等。在中性或弱酸性中比較穩定,遇堿迅速分解。工業品為揮發性小的黃色或棕色油狀液體。
              乳油、粉劑
              大鼠
              14-24
              大鼠
              約67
              殺螟硫磷
              C9H12NO5PS
              棕黃色液體,微有蒜臭,難溶于水,可溶于甲醇、乙醇等多種有機溶劑,遇堿易分解。
              乳油
              大鼠470-516
              大鼠
              約1250
              倍硫磷
              C10H15O3PS2
              純品無色、無臭油狀液,工業品為棕色油狀液,略帶大蒜味。微溶于水,易溶于多數有機溶劑。對光、熱、堿穩定。
              乳油
              大鼠
              約215
              9
              LD50(mg/kg)
              名稱
              分子式
              理化性質
              常用制劑
              經口
              經皮
              二溴磷
              C4H7O4PBr2Cl2
              純品在室溫下為白色晶體,高溫下為無色粘稠油狀液體。不溶于水,易溶于芳香族烴類,難溶于脂肪族烴類。無水狀態時穩定,在含水狀態下可水解,遇堿易分解。工業品為淡琥珀色液體。
              乳油、粉劑
              大鼠
              約430
              大鼠
              約1100
              苯硫磷
              C14H14NO4PS
              純品為淡黃色晶體粉末,難溶于水,能溶于多種有機溶劑。工業品為深黃色液體。遇堿易分解。
              乳油、粉劑
              大鼠
              12-40
              大鼠25-230
              樂果
              C5H12NO3PS2
              純品為無色晶體,有樟腦氣味。易溶于乙醇、丙酮、氯代烴,可溶于芳香族烴。遇堿易分解。工業品為白色結晶或黃棕色油狀液體,有硫醇樣臭氣。
              乳油、粉劑
              大鼠500-600
              大鼠 700-1150
              馬拉硫磷
              C10H19O6PS2
              純品為淡黃色油狀液體,微溶于水,易溶于醇、醚、酮以及芳香族有機溶劑,遇堿易分解。工業品為深褐色液體,有強烈大蒜樣臭味。
              乳油、粉劑
              大鼠
              1800-2800

              約4100
              甲拌磷
              C7H17O2PS3
              純品為略帶臭味的油狀液體,幾乎不溶于水,易溶于乙醇、乙醚、丙酮等多種有機溶劑,在堿中易分解。工業品為黃色至褐色油狀液體,有強烈惡臭味。
              乳油、顆粒劑、粉粒劑
              大鼠 2.1-3.7
              豚鼠
              20-30
              敵百蟲
              C4H8Cl3O4P
              純品白色結晶,帶芳香味,可溶于苯、乙醇及水中,水溶液中分解。在堿性液中可轉化為敵敵畏。
              粉劑、乳油
              大鼠400-900
              大鼠>2000
              辛硫磷
              C12H15O3N2PS
              純品為淡黃色油狀液體,工業品為紅棕色油狀液體,微溶于水,易溶于有機溶劑,遇堿易分解。
              乳油、顆粒劑、微囊懸浮劑
              大鼠
              約800
              10
              LD50(mg/kg)
              名稱
              分子式
              理化性質
              常用制劑
              經口
              經皮
              水胺硫磷
              C11H16NO4PS
              純品為無色片狀結晶,不溶于水和石油醚,溶于多種有機溶劑。工業品為黃色或褐色油狀液體。
              乳油
              大鼠
              25-36
              大鼠
              197-218
              氧樂果
              C5H12NO4PS
              純品為無色透明油狀液體,有韭蔥氣味,可溶于水、乙醇和烴類等多種溶劑,微溶于乙醚,原油為淺黃至黃色透明油狀液體,遇堿易分解。
              乳油
              大鼠
              30-60
              大鼠700-1400
              毒死蜱
              C9H11Cl3NO3PS
              無色或白色結晶,稍有硫醇氣味,難溶于水、溶于大多數有機溶劑,隨pH增加水解速度加快。
              乳油、顆粒劑、水乳劑、微乳劑
              大鼠82-163
              大鼠
              >2000
              三唑磷
              C12H16N3O3PS
              淺黃色油狀物,沸點蒸餾時分解,難溶于水,可溶于大多數有機溶劑。光穩定,酸堿液中水解。
              乳油、顆粒劑、水乳劑、微乳劑、微囊懸浮劑
              大鼠
              57-68
              大鼠
              約1100
              甲胺磷
              C2H8 NO2PS
              純品為白色晶體,工業品為淡黃色油狀液體,有臭味,易溶于水,可溶于醇、丙酮、二氯甲烷、二氯乙烷等。堿性或強酸介質中分解。
              乳油、粉劑
              大鼠
              20-30
              大鼠50-110
              乙酰甲胺磷
              C4H10NO3PS
              純品為白色晶體,易溶于水,可溶于丙酮、乙醇、苯等溶劑,酸性條件下穩定。高溫或堿性介質中分解。
              乳油、可濕性粉劑
              大鼠
              約945

              >2000
              11
              附件2
              酶化學紙片法快速檢測食品和嘔吐物中
              有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量
              1 適用范圍
              本方法適用于食品和嘔吐物中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量的快速篩選測定。該方法定值是以限量的形式出現,僅供篩查,可用其它分析方法進一步確定具體農藥品種和含量。
              2 原理
              有機磷及氨基甲酸酯類農藥能抑制血液中膽堿脂酶活性,在正常的生理條件下,膽堿脂酶能使乙酰膽堿水解成醋酸和膽堿,因而pH值變低,當有機磷及氨基甲酸酯類中毒以后,血液中的膽堿脂酶活性受到抑制,乙酰膽堿水解成醋酸和膽堿的能力變低,而使pH值變高。根據pH值的變化,以溴麝香草酚蘭為指示劑判斷是否有機磷及氨基甲酸酯類中毒。
              3 主要性能指標
              檢測靈敏度:(5~10)μg/10g樣品
              4 試劑
              4.1 三氯甲烷(用10ml安瓿包裝)。
              4.2 溴水(或1ml安瓿包裝)溶液:1ml飽和溴水加水4ml,混勻即成。
              4.3 血清或干燥血清:馬血清可直接使用,如果干燥馬血清,可按瓶簽上標明的情況加水稀釋后用。也可使用健康人血清和鴨血清。
              4.4 乙酰膽堿紙片:稱取氯化乙酰膽堿1g,溴麝香草酚蘭0.084g,溶于30ml95%乙醇。取定量濾紙,一張一張地浸泡在上述溶液中,取出晾干,剪成2cm×2cm的小方塊備用。
              5 分析步驟
              取切碎試樣10g左右于具塞三角瓶中,加三氯甲烷10ml~20ml,振搖數分鐘過濾,取濾液1ml~2ml于蒸發皿中揮干,加水1ml用玻棒充
              12
              分磨擦皿壁,使其充分溶解,如果是甲拌磷和對硫磷,則需加溴水氧化,然后用滴管吸取上述液體滴1滴(約0.05ml)于白磁板上,另加馬血清1滴(約0.05ml)混合作用半分鐘,加蓋乙酰膽堿紙片一張,10min~20min后觀察紙片顏色。同時用水作空對照試驗。
              6 結果判定
              陽性結果:呈綠或藍色
              陰性結果:黃色。
              7 注意事項
              7.1 本法以pH值改變判斷結果,應避免酸堿因素的干擾,白磁板用前清洗干凈,吹干。
              7.2 經試驗馬血清在冰箱中保存2年,其活性不影響測定結果,密封干燥馬血清在低溫保存2年其活性也不影響測定效果。
              7.3 用溴水氧化甲拌磷和對硫磷后可提高靈敏度,以(1+5)飽和溴水1滴氧化1ml檢液為宜。
              7.4 乙酰膽堿試紙片應避光,干燥保存。
              7.5 乙酰膽堿紙片最好使用氯化乙酰膽堿。
              7.6 可使用符合以上要求的酶試劑條產品。
              13
              附件3
              速測卡法(紙片法)快速檢測蔬菜中
              有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量
              參照(GB/T 5009.199─2003)
              1 適用范圍
              本方法準適用于蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量的快速篩選測定。該方法定值是以限量的形式出現,所以,在有條件的單位,可用氣相色譜儀對陽性試樣進行進一步的實驗來確定是哪種農藥和確切含量。
              2 原理
              膽堿酯酶可催化靛酚乙酸酯(紅色)水解為乙酸與靛酚(藍色),有機磷或氨基甲酸脂類農藥對膽堿酯酶有抑制作用,使催化、水解、變色的過程發生改變,由此可判斷出樣品中是否有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農藥的存在。
              3 試劑
              3.1 固化有膽堿酯酶和靛酚乙酸酯試劑的紙片(速測卡)。
              3.2 pH7.5緩沖溶液:分別取15.0g磷酸氫二鈉 [Na2HPO4.12H2O]與1.59g無水磷酸二氫鉀[KH2PO4],用500ml蒸餾水溶解。
              4 儀器
              4.1 常量天平。
              4.2 有條件時配備37℃±2℃恒溫裝置。
              5 分析步驟
              5.1 整體測定法
              a)選取有代表性的蔬菜樣品,擦去表面泥土,剪成1cm左右見方碎片,取5g放入帶蓋瓶中,加入10ml緩沖溶液,振搖50次,靜置2min以上。
              14
              b) 取一片速測卡,用白色藥片沾取提取液,放置10min以上進行預反應,有條件時在37℃恒溫裝置中放置10min。預反應后的藥片表面必須保持濕潤。
              c) 將速測卡對折,用手捏3min或用恒溫裝置恒溫3min,使紅色藥片與白色藥片疊合發生反應。
              d) 每批測定應設一個緩沖液的空白對照卡。
              5.2 表面測定法(粗篩法)
              a) 擦去蔬菜表面泥土,滴2~3滴緩沖溶液在蔬菜表面,用另一片蔬菜在滴液處輕輕摩擦。
              b) 取一片速測卡,將蔬菜上的液滴滴在白色藥片上。
              c) 放置10min以上進行預反應,有條件時在37℃恒溫裝置中放置10min。預反應后的藥片表面必須保持濕潤。
              d) 將速測卡對折,用手捏3min或用恒溫裝置恒溫3min,使紅色藥片與白色藥片疊合發生反應。
              e) 每批測定應設一個緩沖液的空白對照卡。
              6 結果判定
              結果以酶被有機磷或氨基甲酸酯類農藥抑制(為陽性)、未抑制(為陰性)表示。與空白對照卡比較,白色藥片不變色或略有淺藍色均為陽性結果。白色藥片變為天藍色或與空白對照卡相同,為陰性結果。對陽性結果的樣品,可用其它分析方法進一步確定具體農藥品種和含量。
              7 附則
              7.1 速測卡技術指標
              7.1.1 靈敏度指標:速測卡對部分農藥的檢出限見下表。
              15
              部分農藥的檢出限
              農藥名稱
              檢出限(mg/kg)
              農藥名稱
              檢出限(mg/kg)
              甲胺磷
              1.7
              乙酰甲胺磷
              3.5
              對硫磷
              1.7
              敵敵畏
              0.3
              水胺硫磷
              3.1
              敵百蟲
              0.3
              馬拉硫磷
              2.0
              樂果
              1.3
              氧樂果
              2.3
              久效磷
              2.5
              克百威
              0.5
              甲萘威
              2.5
              7.1.2 符合率:在檢出的30份以上陽性樣品中,經氣相色譜法驗證,陽性結果的符合率應在80%以上。
              8 說明
              8.1 蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中,含有對酶有影響的植物次生物質,容易產生假陽性。處理這類樣品時,可采取整株(體)蔬菜浸提或采用表面測定法。對一些含葉綠素較高的蔬菜,也可采取整株(體)蔬菜浸提的方法,減少色素的干擾。
              8.2 當溫度條件低于37℃,酶反應的速度隨之放慢,藥片加液后放置反應的時間應相對延長,延長時間的確定,應以空白對照卡用手指(體溫)捏3min時可以變藍,即可往下操作。注意樣品放置的時間應與空白對照卡放置的時間一致才有可比性??瞻讓φ湛ú蛔兩脑颍阂皇撬幤砻婢彌_溶液加的少、預反應后的藥片表面不夠濕潤,二是溫度太低。
              8.3 紅色藥片與白色藥片疊合反應的時間以3min為準,3min后的藍色會逐漸加深,24h后顏色會逐漸退去。
              16
              附件4
              酶抑制率法(分光光度法)定量檢測蔬菜中
              有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量
              參照(GB/T 5009.199─2003)
              1 適用范圍
              本方法準適用于蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量的快速定量測定。該方法定值是以抑制率的形式出現,可用其它分析方法進一步確定具體農藥品種和含量。
              2 原理
              在一定條件下,有機磷和氨基甲酸酯類農藥對膽堿酯酶正常功能有抑制作用,其抑制率與農藥的濃度呈正相關。正常情況下,酶催化神經傳導代謝產物(乙酰膽堿)水解,其水解產物與顯色劑反應,產生黃色物質,用分光光度計在412nm處測定吸光度隨時間的變化值,計算出抑制率,通過抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農藥的存在。
              3 試劑
              3.1 pH8.0緩沖溶液
              分別取11.9g無水磷酸氫二鉀與3.2g磷酸二氫鉀,用1000ml蒸餾水溶解。
              3.2 顯色劑
              分別取160mg二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)和15.6mg碳酸氫鈉,用20ml緩沖溶液溶解,4℃冰箱中保存。
              3.3 底物
              取25.0mg硫代乙酰膽堿,加3.0ml蒸餾水溶解,搖勻后置4℃冰箱中保存備用。保存期不超過兩周。
              3.4 乙酰膽堿酯酶
              17
              根據酶的活性情況,用緩沖溶液溶解,3min的吸光度變化ΔA0值應控制在0.3以上。搖勻后置4℃冰箱中保存備用,保存期不超過四天。
              可選用由以上試劑制備的試劑盒。乙酰膽堿酯酶的ΔA0值應控制在0.3以上。
              4 儀器
              4.1 分光光度計或相應測定儀。
              4.2 常量天平。
              4.3 恒溫水浴或恒溫箱。
              5 分析步驟
              5.1樣品處理:選取有代表性的蔬菜樣品,沖洗掉表面泥土,剪成1cm左右見方碎片,取樣品1g,放入燒杯或提取瓶中,加入5ml緩沖溶液,振蕩1min~2min,倒出提取液,靜置3min~5min,待用。
              5.2對照溶液測試:先于試管中加入2.5ml緩沖溶液,再加入0.lml酶液、0.1ml顯色劑,搖勻后于37℃放置15min以上(每批樣品的控制時間應一致)。加入0.lml底物搖勻,此時檢液開始顯色反應,應立即放入儀器比色池中,記錄反應3min的吸光度變化值ΔA0。
              5.3樣品溶液測試:先于試管中加入2.5ml樣品提取液,其它操作與對照溶液測試相同,記錄反應3min的吸光度變化值ΔAt。
              6 結果的表述計算
              6.1結果計算見式(1)。
              抑制率(%)=[(ΔA0-ΔAt)/ΔA0]×100…………………………(1)
              式中:ΔA0——對照溶液反應3min吸光度的變化值;
              ΔAt——樣品溶液反應3min吸光度的變化值。
              6.2 結果判定
              結果以酶被抑制的程度(抑制率)表示。 當蔬菜樣品提取液對酶的抑制率≥50%時,表示蔬菜中有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農藥存
              18
              在,樣品為陽性結果。陽性結果的樣品需要重復檢驗2次以上。對陽性結果的樣品,可用其它方法進一步確定具體農藥品種和含量。
              7 附則
              7.1 酶抑制率法技術指標
              7.1.1靈敏度指標:酶抑制率法對部分農藥的檢出限見下表。
              酶抑制率法對部分農藥的檢出限
              農藥名稱
              檢出限(mg/kg)
              農藥名稱
              檢出限(mg/kg)
              敵敵畏
              0.1
              氧樂果
              0.8
              對硫磷
              1.0
              甲基異柳磷
              5.0
              辛硫磷
              0.3
              滅多威
              0.1
              甲胺磷
              2.0
              丁硫克百威
              0.05
              馬拉硫磷
              4.0
              敵百蟲
              0.2
              樂果
              3.0
              克百威
              0.05
              7.1.2 符合率:在檢出的抑制率≥50%的30份以上樣品中,經氣相色譜法驗證,陽性結果的符合率應在80%以上。
              8 說明
              8.1 蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中,含有對酶有影響的植物次生物質,容易產生假陽性。處理這類樣品時,可采取整株(體)蔬菜浸提。對一些含葉綠素較高的蔬菜,也可采取整株(體)蔬菜浸提的方法,減少色素的干擾。
              8.2 當溫度條件低于37℃,酶反應的速度隨之放慢,加入酶液和顯色劑后放置反應的時間應相對延長,延長時間的確定,應以膽堿酯酶空白對照測試3min的吸光度變化ΔA0值在0.3以上,即可往下操作。注意樣品放置時間應與空白對照溶液放置時間一致才有可比性。膽堿酯酶空白對
              19
              照溶液3min的吸光度變化ΔA0值<0.3 的原因:一是酶的活性不夠,二是溫度太低。
              8.3 考慮到酶試劑的有效期很短,最好在實驗前,測試酶的活性,達到要求后才能往下進行。
              8.4 也可使用符合上述方法要求的快速檢測儀。
              20
              附件5
              火焰光度檢測器(FPD)毛細管氣相色譜法測定
              食品、毒餌、飲水、嘔吐物等樣品中的有機磷農藥
              1 適用范圍
              本方法適用于食品、毒餌、飲水、嘔吐物等樣品中有機磷農藥的應急檢測。
              2 原理
              樣品中微量有機磷農藥經前處理,定量注入色譜柱,各有機磷農藥在柱上逐一分離,依次在火焰光度檢測器富氫火焰中燃燒,發射出526nm波長的特征光。光強度與含磷量成正比,此特征光通過磷濾光片,由光電倍增管檢測進行定量分析。
              3 方法重要參數
              3.1 線性范圍:(0.5~10.0)μg/ml(標準溶液);
              3.2 精密度(RSD):≤10%;
              3.3 回收率:70%~110%;
              3.4 檢出限:0.5μg/ml;
              3.5 干擾:有些有機磷農藥出峰可能重疊,檢測出有機磷農藥時,可更換不同色譜柱或用GC/MS法進行確認。
              3.6 全程測定時間:30min~60min。
              4 試劑和儀器
              4.1 試劑和材料
              4.1.1 有機磷農藥標準品:分析試劑級。
              4.1.2 有機磷農藥標準貯備液(10mg/L):用丙酮配制單個有機磷農藥標準貯備液。
              4.1.3 丙酮、乙酸乙酯,分析純試劑。
              4.1.4 高純氣體:氦氣、氫氣、氮氣、空氣。
              21
              4.2 主要儀器和設備
              4.2.1 氣相色譜儀
              火焰光度檢測器
              色譜柱:DB-1、DB-5、DB-1701、DB-210,詳見表1。
              4.2.1 玻璃器皿:分液漏斗、小瓶、試管、容量瓶。
              4.2.3 微量注射器:10μl。
              4.2.4 氮吹儀、離心機。
              5 操作步驟
              5.1 樣品前處理
              5.1.1 殘留濃度較高的樣品
              a)毒餌
              準確稱取約0.02g樣品于2ml帶塞離心管中,加入1ml乙酸乙酯,渦旋振蕩溶解(如果不溶,渦旋振蕩2min),取此溶液用乙酸乙酯稀釋100倍,待測。
              b)盛放毒物容器
              取5ml乙酸乙酯加入盛放毒物容器中,振搖1min,提取液轉移入試管中,待測。
              5.1.2 固體樣品
              準確稱取約0.2g樣品(顆粒大的固體需先研磨碎)于5ml帶塞離心管中,加入2ml乙酸乙酯, 渦旋振蕩2min,離心分離,收集上清液于另一5ml帶塞離心管中,重復提取1次,合并有機相, 用無水硫酸鈉脫水,于50℃下用氮吹儀濃縮至干,加500μl乙酸乙酯,待測。
              5.1.3 半固體樣品
              準確稱取約1g樣品于10ml帶塞離心管中,加適量無水硫酸鈉,用玻璃棒研磨為粉狀,加5ml乙酸乙酯,渦旋振蕩2min,離心分離,收集上清液于另一5ml帶塞離心管中,重復提取1次,合并有機相,用無水硫酸鈉
              22
              脫水,于50℃下用氮吹儀濃縮至干,加500μl乙酸乙酯,待測。
              5.1.4 液體樣品
              準確量取1ml液體樣品放入5ml帶塞離心管中,加入2ml乙酸乙酯,渦旋振蕩2min,8000rpm離心2min,用滴管分離上清液,重復提取1次,合并有機相,用無水硫酸鈉脫水,于50℃下用氮吹儀濃縮至干,加500μl乙酸乙酯,待測。
              5.2 分析步驟
              5.2.1 儀器調試
              根據儀器說明書和表1列出的色譜條件調試儀器;分析開始時,進溶劑空白,保證沒有溶劑干擾。
              5.2.2 校準
              取標準貯備液逐級稀釋至濃度為(0.50~10.0)μg/ml的混合標準溶液,各取1μl混合有機磷標準溶液,注入氣相色譜儀。以測得的峰面積為縱坐標,濃度為橫坐標和標準液濃度,繪制標準曲線。
              每次分析樣品時,至少用5個標準點進行標準曲線,標準曲線需覆蓋分析方法范圍,標準樣品進樣體積與試樣的體積相同,盡可能同時分析。
              5.2.3 樣品測定
              取1μl試液,注入氣相色譜儀,測定峰面積,外標法定量;保留時間定性(表2數據為不同的有機磷農藥的保留時間參考值)。
              5.2.4 計算
              a)固體(半固體)樣品
              ρ = ρ1×V1/m
              式中,
              ρ為樣品中有機磷農藥質量濃度,mg/kg;
              ρ1為從標準曲線查出的有機磷農藥質量濃度,μg/ml;
              V1為試樣定容體積,ml
              23
              m為樣品質量,g
              b)液體樣品
              ρ = ρ1×V1/V
              式中,
              ρ為樣品中有機磷農藥質量濃度,mg/L;
              ρ1為從標準曲線查出的有機磷農藥質量濃度,μg/ml;
              V1為試樣定容體積,ml;
              V為取樣體積,ml。
              6 質量控制
              檢測時,應同時加做空白平行樣品,檢測出有機磷農藥時,可更換不同色譜柱或用GC/MS法進行確認。
              表1 推薦的色譜柱和色譜條件*
              參數
              大口徑彈性石英毛細管柱
              固定相
              DB-1
              DB-5
              DB-1701
              DB-210
              極性
              非極性
              弱極性
              中極性
              中極性
              長度(m)
              30
              30
              30
              30
              內徑(mm)
              0.32
              0.32
              0.32
              0.32
              膜厚(mm)
              0.25
              1.0
              1.0
              0.25
              進樣體積(μl)
              1
              1
              1
              1
              進樣方式
              分流
              直接
              直接
              分流
              進樣口溫度(℃)
              240
              240
              240
              240
              檢測器溫度(℃)
              200
              200
              200
              200
              初始溫度(℃)
              100
              125
              125
              100
              最終溫度(℃)
              275
              275
              275
              250
              24
              程序升溫速率(℃/min)
              3.0
              4.0
              4.0
              3.0
              載氣
              氦氣
              氦氣
              氦氣
              氦氣
              柱前壓(psi)
              15
              15
              15
              15
              *實際條件可根據色譜柱和分析目標物確定,上述條件相應于表2的保留時間。
              表2 有機磷農藥的保留時間
              DB-1
              DB-5
              DB-1701
              DB-210
              序號
              中文名稱
              RT
              min
              RRT*min
              出峰溫度(℃)
              RT
              (min)
              RT
              min
              RT
              min
              1
              特普
              3.71
              0.128
              111
              5.47
              7.18
              7.88
              2
              三乙基硫代磷酸酯
              4.37
              0.151
              113
              6.34
              7.14
              4.93
              3
              甲胺磷
              5.12
              0.177
              115
              7.64
              13.61
              12.03
              4
              敵敵畏
              5.81
              0.200
              117
              8.24
              10.67
              10.54
              5
              速滅磷
              10.45
              0.360
              131
              12.92
              16.69
              19.20
              6
              滅克磷
              17.15
              0.592
              151
              19.09
              21.52
              20.10
              7
              二溴磷
              17.61
              0.608
              153
              /
              /
              23.17
              8
              百治磷
              18.00
              0.621
              154
              19.94
              25.84
              31.43
              9
              久效磷
              18.27
              0.630
              155
              20.12
              28.11
              31.60
              10
              治螟磷
              19.06
              0.658
              157
              /
              /
              23.09
              11
              甲拌磷
              19.18
              0.662
              158
              20.94
              23.10
              18.92
              12
              樂果
              19.44
              0.671
              158
              21.84
              /
              /
              13
              內吸磷-s
              20.15
              0.695
              160
              21.70
              25.06
              24.97
              14
              敵殺磷/二惡磷
              21.30
              0.735
              164
              23.04
              26.33
              23.46
              15
              地蟲磷
              22.04
              0.760
              166
              23.57
              25.87
              22.20
              16
              特丁硫磷
              22.22
              0.767
              168
              23.80
              25.02
              21.52
              17
              乙拌磷
              23.09
              0.797
              169
              24.19
              26.43(F)
              22.78
              18
              二嗪磷
              23.37
              0.806
              170
              23.75
              25.00(D)
              20.99
              19
              甲基對硫磷
              25.37
              0.875
              176
              26.48
              31.37
              33.21
              20
              砜吸磷
              26.(5)
              0.90
              179
              /
              /
              /
              21
              皮繩磷
              26.86
              0.927
              181
              27.39
              29.30
              26.27
              22
              甲基嘧啶磷
              28.13
              0.971
              184
              27.90
              29.72
              26.77
              23
              馬拉硫磷
              28.53
              0.984
              186
              28.33
              31.78
              33.08
              24
              百治屠/倍硫磷
              28.74
              0.992
              186
              28.93
              31.78
              29.35
              25
              對硫磷
              28.98
              1.000
              187
              29.10
              33.28
              35.60
              26
              毒死蜱
              29.11
              1.004
              187
              29.10
              30.79
              27.72
              27
              育畜磷
              29.64
              1.023
              189
              29.54
              34.00
              35.34
              28
              異柳磷
              31.91
              1.101
              196
              31.17
              33.81
              33.02
              29
              殺蟲威
              33.26
              1.148
              200
              32.60
              35.96
              37.01
              30
              克線磷
              34.09
              1.176
              202
              33.03
              37.14
              38.95
              31
              脫葉亞磷
              35.19
              1.214
              206
              /
              /
              30.57
              25
              32
              豐索磷
              36.61
              1.263
              210
              35.78
              42.41
              46.98
              33
              乙硫磷
              37.88
              1.307
              214
              36.30
              39.30
              37.96
              34
              硫丙磷
              38.49
              1.328
              216
              36.96
              39.54
              37.11
              35
              磷酸三苯酯
              40.88
              1.411
              223
              39.06
              /
              /
              36
              苯硫磷
              42.64
              1.471
              228
              41.06
              47.83
              47.13
              37
              乙基保棉磷
              44.16
              1.524
              232
              43.67
              /
              49.25
              38
              對溴磷
              45.12
              1.557
              235
              43.91
              47.38
              41.68
              39
              保棉磷
              46.55
              1.606
              240
              46.50
              47.43
              50.40
              40
              蠅毒磷/香豆磷
              49.31
              1.702
              248
              50.10
              67.86
              60.88
              *RRT:對硫磷的相對保留時間

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